產(chǎn)品詳情介紹
本產(chǎn)品采用TaqMan實(shí)時熒光定量PCR法檢測支原體DNA，用于定性檢測如培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)物、生物制品等樣品中的支原體污染?？蓹z測的支原體種類涵蓋范圍廣，包括柔膜菌綱（Mollicutes）下的多種支原體（Mycoplasma spp.）、無膽甾原體（Acholeplasma spp.）、螺原體（Spiroplasma spp.）等。本試劑盒按照EP 2.6.7和JP G3支原體檢測相關(guān)指南和要求進(jìn)行驗(yàn)證。
本試劑盒中的TransDetect? qPCR Mycoplasma SuperMix組分包含Taq熱啟動酶、針對支原體檢測特殊優(yōu)化的qPCR反應(yīng)緩沖液、dNTPs、PCR增強(qiáng)劑、穩(wěn)定劑。此外，本反應(yīng)液引入了dUTP/UDG系統(tǒng)，可在反轉(zhuǎn)錄前降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR產(chǎn)物導(dǎo)致的交叉污染。Primer&Probe Mix為擴(kuò)增支原體序列和擴(kuò)增Internal Control的引物、探針。FAM通道檢測支原體特異性擴(kuò)增；VIC通道檢測Internal Control的擴(kuò)增。Internal Control可PCR 反應(yīng)階段加入，排除因 樣品中含有PCR抑制因素導(dǎo)致的假陰性結(jié)果；內(nèi)部對照（IC）也可在樣品提取階段加入，以評估提取效果，排除DNA提取不當(dāng)而導(dǎo)致的假陰性。本試劑盒與支原體DNA提取純化試劑盒MagicPure? 32 Mycoplasma DNA Kit（EH401-32）配套使用，高效提取樣品中的支原體DNA，檢測限可達(dá)到10 CFU/ml。
靈敏度高
10種10 CFU/mL支原體標(biāo)準(zhǔn)株DNA的擴(kuò)增結(jié)果顯示，TransGen產(chǎn)品在檢出限10 CFU/mL濃度下，檢出率可達(dá)到100%。（擴(kuò)增圖是發(fā)酵支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果展示）
以上物種基因組DNA的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性，表明TransGen產(chǎn)品特異性高，與非支原體物種無交叉反應(yīng)。
耐用性高
分別用以上基質(zhì)稀釋陽性支原體懸液，對照基質(zhì)為無核酸酶水，DNA提取后進(jìn)行qPCR檢測。結(jié)果表明，各基質(zhì)組的Ct值與對照接近， Ct值滯后不超過0.6，上述基質(zhì)對支原體檢測無明顯影響。
凍融穩(wěn)定性高
TransGen產(chǎn)品反復(fù)凍融5次、10次、15次，產(chǎn)品性能不受影響。
穩(wěn)健性好
TransGen產(chǎn)品可以耐受20%的引物或擴(kuò)增Mix的加樣誤差，不影響結(jié)果判斷。
儀器兼容性廣
AG: 精氨酸支原體質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品 LA:萊氏無膽甾原體質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品
以不同濃度的精氨酸支原體和萊氏無膽甾原體的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板，在不同儀器上進(jìn)行擴(kuò)增得到的Ct值。結(jié)果顯示，TransGen產(chǎn)品兼容性高，可適用于不同機(jī)型熒光定量qPCR儀。對于接近檢出限(1 copy/μL)的弱陽樣本，均可穩(wěn)定檢出。
